## 产品及特性

尊龙凯时人生就博推出了一款基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具备以下特点：

1. **即开即用**：用户仅需提供样品DNA模板，方便快捷。

2. **高灵敏度**：经过优化的引物及其他组分，确保检测灵敏度显著提高。

3. **阳性对照**：提供阳性对照样本，以便于准确区分假阴性结果。

4. **特异性强**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高保守区域，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. **定性与定量检测**：该产品能够支持定性和定量检测，定量时线性范围可达至少5个数量级。

6. **充分的反应次数**：本产品能支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **科研专用**：本产品仅限于科研使用。

## 使用方法

### 一、DNA提取（样本制备区）

可使用自选方法提取和纯化样品DNA，并与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（注意：阳性对照浓度较高，稀释操作应在独立区域内进行，避免污染样品。）

1. 标记6个离心管，分别标注为7，6，5，4，3，2。
2. 使用带芯枪头向每个管中加入45μL DEPC-H₂O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放冰待用。
5. 依次重复上述操作，直到获得6个不同稀释度的标准曲线样品。
6. 若不需制作标准曲线，只需将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

### 三、试剂配制（试剂准备区）

若待检样品数量为N，准备N+2个qPCR管（N个待检样品+1个阴性对照+6个阳性对照），分别向每个PCR管中加入相关成分（具体见详细说明书，可以向尊龙凯时人生就博索取）。

### 四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H₂O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置在PCR扩增仪器中，按下列程序进行扩增（具体见详细说明书，可向尊龙凯时人生就博索取）。

### 六、结果分析

1. 如果制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值推算出样品DNA浓度的log值。

2. 若未制作标准曲线，结果标准判定如下：

• 阳性对照：Ct值<30，显著指数增长，呈S型曲线。
• 阴性对照：Ct值38或无Ct值，未检测到显著指数增长。
• 样本检测：Ct值<35，显著指数增长，结果为阳性；Ct值38或无Ct值，未检测到结果为阴性；Ct值在35-38范围内，需复检。

## 运输及保存

请在低温下运输，-20℃保存，保存期限为一年。阳性对照应单独存放，避免污染其他试剂。