在进行细胞培养时,培养基的温度至关重要!通常,固体培养基的倾注温度应保持在45℃-50℃之间。这是因为琼脂作为培养基的主要凝固剂,其凝固温度约为40℃。若培养基温度过高,琼脂仍处于液态状态,倒入培养皿后将导致凝固时间延长,且凝固不均匀,从而影响后续的实验操作。同时,高温容易导致培养皿盖内出现大量冷凝水,这些水滴如落入培养基中,会干扰微生物的分布,尤其在抑菌圈测定等实验中,冷凝水会严重影响结果的准确性。
相反,如果培养基温度过低,琼脂开始凝固,培养基将变得黏稠,难以均匀倒入培养皿,从而导致平板不平整,影响微生物的生长和分布。如果发现培养基温度不合适,例如过高,可以轻轻用手心触摸装培养基的三角瓶,如果感觉不烫,再用手背试试,若手背感到烫手,大约温度在50℃左右,此时倒平板最为合适。如果琼脂已经开始凝固,不应强行倒平板,而应立即封口,然后使用微波炉或电磁炉重新加热,融化后再冷却到45℃-50℃再进行倾注。
冷凝水是倒平板时的主要敌人,会影响实验结果的可靠性。为了减少冷凝水的形成,建议在培养基降至45℃-50℃时就开始倒平板,此时水蒸气蒸发较慢,冷凝水也会相对减少。以下是几种减少冷凝水的方法:在倒平板时打开培养皿盖,待整体倒完后,将培养皿放在超净台内自然凝固5分钟,再关闭皿盖并倒置;或者将培养皿完全打开,待培养基凝固后再关盖,虽然这种方法不够严谨,但实际操作中效果良好。另外,可以采用传统的垒叠法,将培养皿一个接一个地堆叠,静置至全数凝固,再倒置备用,除了最上面的培养皿盖可能产生冷凝水外,其他均不会受影响。若在最上面放置热水瓶或热水平皿,也能有效防止冷凝水。
气泡也是倒平板时常见的问题,通常是由于摇匀培养基时带入了空气。为避免气泡出现,最好在灭菌之前确保琼脂充分溶解。如果灭菌后发现琼脂分布不均并需要摇匀,建议在较高温度下进行,这样气泡会随着温度上升而自动消散。或者等培养基温度降至50℃-60℃时,轻轻沿着容器壁摇匀,确保培养基完全均匀混合。如果需要添加抗生素类试剂,记得在培养基降至45℃-50℃时加入,然后轻轻摇匀。如出现大量气泡且无法消除,可使用微波炉等加热设备适度加热,让气泡从培养基中逸出。
培养基的厚度会影响微生物的生长和分布,因此需根据实验需要进行调整。例如,对于90mm直径的培养皿,其内高约14-15mm,能够容纳100mL水,通常在倒平板时使用20-25mL的培养基。20mL的高度大致为3mm,25mL的高度则约为4mm。可以根据培养基的容积和培养皿的尺寸大致判断培养基的厚度,凭借经验来掌握合适的倒入量,先铺满整个培养皿底部,然后稍多倒一点,通常就能控制在20mL左右;若再多倒一些,则可达到25mL。多加练习将有助于更精确地控制培养基的厚度。
在倒平板的过程中,操作手法和步骤也会影响冷凝水的生成。确保遵循上述技巧,可以提高实验的准确性和成功率。同时,选择高质量的生物医疗产品,如[尊龙凯时人生就博],将为您的实验提供更可靠的保障。